Biologifagligt indhold
ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) er navnet på en række kvalitative og kvantitative analysemetoder til bestemmelse af antistoffer eller antigener.
Metoderne kendetegnes ved at første skridt i analyseproceduren er en adsorption (klæbning) af enten et antigen eller et antistof til en fast overflade – her plast. Desuden indgår et enzym, som er covalent bundet til antigenet eller antistoffet og et konjugat. Konjugatet er fremstillet ved, at man har immuniseret kaniner med IgG, mod den sygdom, man vil undersøge.
Kilde: Grundig grundbog til biologi på C- og B-niveau.
Spørgsmål 1
Kan ovenstående ELISA bruges til kanin anti insulin?
Ja- det enzym konjugerede genkender kanin anti insulin
Ja- hvis man har oprenset kanin anti insulin
Nej- æsel anti kanin IgG vil genkende andre af kaninens antistoffer
Nej- antistoffer genkender kun antigener - ikke andre antistoffer
Spørgsmål 2
Se på ovenstående ELISA
Vil man kunne forvente at påvise tilstedeværelse af BFP?
Ja- kanin anti stoffer er poliklonale og kan bruges til alle immunkemiske metoder
Ja- antistoffet genkender antigenet og er konjugeret til enzym
Nej- enzymet ændrer proteinets foldning så det ikke genkender antigenet
Nej- BFP er for lille til at der kan dannes antistoffer imod det
Spørgsmål 3
Se på ovenstående ELISA
Vil man kunne forvente at aflæse/påvise tilstedeværelse af BFP?
Ja- antistoffet genkender antigenet
Ja- antistoffet præcipiterer med antigenet
Nej- antistoffet genkender ikke antigenet
Nej- der er ikke konjugeret enzym til antistoffet
Spørgsmål 4
Se på denne ELISA
Kan man forvente at påvise PP3?
Ja- antistoffet genkender antigenet
Ja- antistoffet præripiterer med antigenet
Nej- antistoffet genkender ikke antigenet
Nej- der er ikke konjugeret et enzym til antistoffet
Spørgsmål 5
Kan der i overstående ELISA forventes farveomslag i brønden
Ja - der er jo et enzym tilstede
Ja - antistoffet genkender antigenet
Nej - Rotte antistoffer er polyklonale og præcipiterer - derfor inaktiveres enzymet
Nej - Antistoffet genkender ikke antigenet og vaskes derfor bort under vaske procedyren
Spørgsmål 1.1
Kan ovenstående ELISA bruges til påvisning af insulin?
Ja - Dit coatede kanin anti insulin genkender insulin og æsel anti kanin IgG Konjugeret til enzym genkender kanin anti insulin.
Ja - Hvis det enzym konjugeret genkender dit primære antistof kan de danne et signal
Nej - Epitopen der skal genkendes af kanin anti insulin er sandsynligvis optaget af binding til dit coatede antistof
Ja - Kanin antistoffer er polyklonale og der er derfor ledige epitoper også tilgængelige for det andet kanin anti insulin antistof.
Spørgsmål 2.1
Kan ovenstående ELISA bruges til påvisning af Insulin?
Ja - Det enzym konjugerede antistof genkender mus anti insulin
Ja - Der er enzym til stede og de er det vigtigste i ELISA
Nej - Kanin anti mus IgG vil binde både til dit coatede antistof (mus anti insulin) og til mus anti insulin der binder til antigenet ovenfra
Nej - epitopen der skal genkendes af mus anti Insulin er sandsynligvis optaget af binding til det coatede antistof
Spørgsmål 3.1
Kan ovenstående ELISA bruges til påvisning af Insulin?
Ja - Mus anti insulin genkender insulin i prøven og ged anti insulin genkender også insulin der udover genkender kanin anti ged IgG - konjugeret til enzym “anti gen ged anti insulin”
Ja - Mus anti insulin genkender insulin
Nej - Det enzymkonjugerede antistof genkender jo ikke insulin
Nej - Man skal altid bruge anti stoffer fra det samme dyr på begge sider af antigenet